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  • Técnicas utilizadas:

    1.- Cultivos celulares: de líneas celulares comerciales; cultivos primarios obtenidos de tejidos animales; de células extraídas de muestras tumorales de pacientes.

    2.- Obtención y mantenimiento en cultivo de células madre tumorales desde muestras de tumores de pacientes.

    3.- Estudios de expresión génica (análisis de mRNA mediante RT-PCR; de poteínas mediante Western blot).

    4.- Expresión y silenciamiento de genes en células animales (o de bacterias en el caso de clonación).

    5.- Estudios mofológicos: microscopía óptica, microscopía electrónica de transmisión, inmunohistoquímica.

    6.- Citometría de flujo: estudios de apoptosis, necrosis, ciclo celular, oxidantes intracelulares, detección de proteínas de superficie tras su unión a anticuerpos fluorescentes, salida de drogas hacia el espacio extracelular, etc.

    Mediante la combinación de las técnicas mencionadas previamente realizamos estudios completos de proliferación y muerte celular (apoptosis, necrosis, autofagia).

    Tambien, fundamentalmente combinando las técnicas mencionadas se estudia el estado oxidativo celular: medida de oxidantes intracelulares, enzimas antioxidantes (actividad y expresión), glutation, etc; Medida del potecial de membrana mitocondrial.

    7.- Estudios de metabolismo: Niveles intracelulares de glucógeno y niveles intracelulares de lactato mediante ensayos enzimáticos; Estudios del transporte de la glucosa al interior celular mediante el compuesto fluorescente NBDG (por citometría de flujo); Caracterización del fenotipo energético mediante el uso de microarrays (paneles metabólicos) y lectura por espectrofluorimetría; Determinación de los niveles de ATP por bioluminiscencia.

    8.- Experimentación animal: inducción de tumores en ratones inmunodeprimidos (NOD/SCID, Balb/c-nu) mediante inyección / implante de células tumorales.